PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的簡稱。
是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大特定的DNA片段，可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。通過DNA基因追蹤系統(tǒng)，能迅速掌握患者體內(nèi)的病毒含量，其精確度高達(dá)納米級別，精確檢測乙肝病毒在患者體內(nèi)存在的數(shù)量、是否復(fù)制、是否傳染、傳染性有多強(qiáng)、是否必要服藥、肝功能有否異常改變能及時(shí)判斷病人最適合使用哪類抗病毒藥物、判斷藥物療效如何、給臨床治療提供了可靠的檢驗(yàn)依據(jù)。
臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室又稱分子實(shí)驗(yàn)室、PCR實(shí)驗(yàn)室。已逐漸成為檢驗(yàn)領(lǐng)域必不可少的一部分，原則上臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)設(shè)置以下區(qū)域：試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。
這4個(gè)區(qū)域在物理空間上必須是完全相互獨(dú)立的，各區(qū)域無論是在空間上還是在使用中，應(yīng)當(dāng)始終處于完全的分隔狀態(tài)，不能有空氣的直接相通。
PCR擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室原則上分為四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域：試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。為避免交叉污染，進(jìn)入各個(gè)工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行，即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。 各實(shí)驗(yàn)區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應(yīng)通過傳遞窗進(jìn)行。
臨床PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的“16字口訣”：各區(qū)獨(dú)立、注意風(fēng)向、因地制宜、方便工作。
(1)在物理空間上，必須是完全相互獨(dú)立的，各 區(qū)域無論是在空閑還是在使用中，應(yīng)始終處于 完全的分隔狀態(tài); (2)不能有空氣的直接相通。
理想的PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)A
理想的PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)B
平面設(shè)計(jì)圖示
臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室需要依據(jù)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法》、《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》、《生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范》等相關(guān)規(guī)定進(jìn)行規(guī)劃建設(shè)。
1、二級生物安全實(shí)驗(yàn)室的裝修
根據(jù)《人間傳染的病原微生物名錄》， PCR實(shí)驗(yàn)室所操作致病性生物因子大多屬于第二類病原微生物，實(shí)驗(yàn)活動(dòng)所需生物安全實(shí)驗(yàn)室級別的生物危害等級為BSL-2。列舉裝修要點(diǎn)如下：
1、實(shí)驗(yàn)室墻壁、頂板和地板應(yīng)當(dāng)光滑、易清潔、防滲漏并耐化學(xué)品和消毒劑的腐蝕。地面應(yīng)防滑，不得在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)鋪設(shè)地毯和懸掛窗簾。實(shí)驗(yàn)室的墻體，包括頂棚，應(yīng)結(jié)構(gòu)牢固、氣密性好、所有陰角采用圓弧形線條過渡；墻體內(nèi)壁光潔、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒；墻體和吊頂建議使用彩鋼板。
2、地面材料應(yīng)滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。
3、燈具要選用凈化燈具，能達(dá)到便于清洗、不積塵的特點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)應(yīng)急照明裝置，同時(shí)考慮合適的安裝位置，以保證人員安全離開實(shí)驗(yàn)室。
4、有可靠的電力供應(yīng)和應(yīng)急照明。每個(gè)房間必須裝有紫外線殺菌燈，殺菌燈的安裝高度在1.8～2.1m之間。
5、傳遞窗內(nèi)部安裝有紫外燈，供消毒用。
6、應(yīng)配備足夠的固定電源插座，避免多臺設(shè)備使用共同的電源插座。應(yīng)有可靠的接地系統(tǒng)，應(yīng)在關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)安裝漏電保護(hù)裝置或監(jiān)測報(bào)警裝置。
7、實(shí)驗(yàn)室臺(桌)柜和座椅等應(yīng)穩(wěn)固和堅(jiān)固，邊角應(yīng)圓滑。實(shí)驗(yàn)臺面應(yīng)防水，并能耐受熱、有機(jī)溶劑、酸堿、消毒劑及其他化學(xué)劑。一般采用環(huán)氧樹脂臺面。
8、實(shí)驗(yàn)臺中的櫥柜和實(shí)驗(yàn)臺應(yīng)牢固，實(shí)驗(yàn)臺、柜和其他設(shè)備之間應(yīng)保持一定距離，以便清潔。
9、實(shí)驗(yàn)室門為凈化門，應(yīng)有可視窗并帶自動(dòng)閉門器，實(shí)驗(yàn)室的門與門不能相對開啟，必須錯(cuò)位開啟。并達(dá)到適當(dāng)?shù)姆阑鸬燃?，門鎖及門的開啟方向應(yīng)不妨礙室內(nèi)人員逃生。
10、實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)洗手池，水龍頭開關(guān)宜為非手動(dòng)式，宜設(shè)置在靠近出口處。
11、給水管道應(yīng)設(shè)置倒流防止器或其他有效的防止回流的裝置；給排水系統(tǒng)應(yīng)不滲漏，下水應(yīng)有防回流設(shè)計(jì)。
12、應(yīng)配備適用的應(yīng)急器材，如消防器材、意外事故處理器材、急救器材等。
13、應(yīng)配備適用的通訊設(shè)備。
實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)有布局、工程材料、通風(fēng)系統(tǒng)、排風(fēng)系統(tǒng)、壓力梯度、建筑工藝等幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)，總結(jié)如下：
墻面：主體結(jié)構(gòu)建議使用彩鋼板圍護(hù)，墻面光潔、不產(chǎn)塵積塵、耐腐蝕，易清潔、無縫隙；
地面：建議使用PVC卷材，、耐腐蝕、無縫隙、無滲漏；
陰陽角：均采用圓弧角密封處理，不易積塵；
傳遞窗：必須設(shè)置互鎖(機(jī)械或電子)；
主入口：實(shí)驗(yàn)室主入口設(shè)有門禁管理；
通風(fēng)系統(tǒng)：避免交叉污染；
排風(fēng)系統(tǒng)：宜設(shè)置高效過濾器凈化；
氣流組織：采用上送下排形式；
壓力梯度：壓力梯度控制通過微壓差計(jì)及精密自控系統(tǒng)控制；
排水系統(tǒng)：排水系統(tǒng)應(yīng)不滲漏，下水應(yīng)有防回流設(shè)計(jì)。
應(yīng)急用電：應(yīng)有緊急發(fā)電設(shè)備或雙回路供電。關(guān)鍵設(shè)備應(yīng)配備足夠的UPS并接入設(shè)備。
防護(hù)設(shè)施：設(shè)置洗眼裝置，必要時(shí)應(yīng)有應(yīng)急噴淋裝置；設(shè)置非接觸式操作理念(感應(yīng)式水龍頭、感應(yīng)式自動(dòng)門、互鎖傳遞窗等)。
2、工程材料列表（列舉部分）
3、PCR實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備表（根據(jù)具體項(xiàng)目調(diào)整）
試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū) (PCR 1區(qū))
功能：貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴(kuò)增反應(yīng)混合液的準(zhǔn)備，以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準(zhǔn)備。
標(biāo)本制備區(qū)（PCR 2區(qū)）
功能：核酸（RNA、DNA）提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管。對于涉及臨床樣本的操作，應(yīng)符合生物安全二級實(shí)驗(yàn)室防護(hù)設(shè)備、個(gè)人防護(hù)和操作規(guī)范的要求。
擴(kuò)增區(qū)（PCR 3區(qū)）
功能：DNA擴(kuò)增及檢測。
產(chǎn)物分析區(qū) （PCR 4區(qū)）
功能：擴(kuò)增片段的進(jìn)一步分析測定，如雜交、酶切電泳、變性高效液相分析、測序等。(開展項(xiàng)目不同對應(yīng)不同儀器)
4、PCR實(shí)驗(yàn)室合并情況
PCR不同區(qū)域可合并情況（一）
場景：使用實(shí)時(shí)熒光PCR儀
依據(jù)：衛(wèi)生部辦公廳關(guān)于印發(fā)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增管理辦法》的通知；醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作導(dǎo)則；衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號
合并：擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可合并
PCR不同區(qū)域可合并情況（二）
場景：采用樣本處理、核酸提取及擴(kuò)增檢測為一體的自動(dòng)化分析儀
依據(jù)：衛(wèi)生部辦公廳關(guān)于印發(fā)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增管理辦法》的通知；醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作導(dǎo)則；衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號
合并：標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可合并。
1）確認(rèn)意向，簽訂合同：客戶需求了解，項(xiàng)目效益評估，裝修現(xiàn)場條件評估。
2）建設(shè)規(guī)劃，布局設(shè)計(jì)：指導(dǎo)分區(qū)布局設(shè)計(jì)和平面布置，裝修現(xiàn)場專業(yè)評估。
3）籌建及施工：施工和設(shè)施安裝指導(dǎo)。
4）實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備配置：根據(jù)項(xiàng)目需求提供設(shè)備清單，協(xié)助/完成采購。
5）實(shí)驗(yàn)室布置：分區(qū)標(biāo)識指導(dǎo)，物品布置指導(dǎo)。
6）人才技能培訓(xùn)：專業(yè)技術(shù)培訓(xùn)（可與實(shí)驗(yàn)室布置同步進(jìn)行）
7）實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收：指導(dǎo)質(zhì)量體系搭建、指導(dǎo)驗(yàn)收前準(zhǔn)備、協(xié)助驗(yàn)收申辦、驗(yàn)收過程陪同等。
儀器、試劑要求
儀器：必須三證齊全
試劑：必須NMPA批準(zhǔn)
項(xiàng)目：新開展檢測項(xiàng)目應(yīng)有相應(yīng)臨床科室出具的評估報(bào)告；在技術(shù)審核前應(yīng)進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證
實(shí)驗(yàn)人員要求
必須持有PCR上崗合格證，PCR 實(shí)驗(yàn)室操作人員至少2名；
通過參加省臨床檢驗(yàn)中心組織的臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員上崗培訓(xùn)班獲得上崗證，培訓(xùn)班內(nèi)容包括理論培訓(xùn)和實(shí)驗(yàn)培訓(xùn)。
需要具備資格、培訓(xùn)、技能與業(yè)績檔案
需要有培訓(xùn)記錄及實(shí)施記錄：每人需有年度培訓(xùn)內(nèi)容（包括外出學(xué)習(xí)、進(jìn)修、內(nèi)部質(zhì)量手冊學(xué)習(xí)、業(yè)務(wù)學(xué)習(xí)及新項(xiàng)目開展學(xué)習(xí)等）。
除新冠檢測外，其它項(xiàng)目列舉如下：
