
1 試劑準備區(qū)
1.1 到配電房先打開風機(先開送風機,再開排風機),再把空調(diào)系統(tǒng)打開。
1.2 其它室的用品不得帶入本室。
1.3 從PCR實驗室號入口門進入實驗室,到達試劑準備區(qū)的緩沖間,更換專用工作服,進入試劑準備區(qū),實驗中須戴一次性手套,手套常更換。
1.4 打開已滅菌的超凈臺,通風一段時間,排走臭氧。取出當次實驗需配制和使用的試劑,其余試劑要立即收好放回冰箱內(nèi)。
1.5 實驗作業(yè)完成時,應及時清理工作臺,做好實驗登記,應使用本室專用的記錄本和筆,打開超凈臺的紫外燈旋鈕到20分鐘處。使用過的離心管、吸頭須置于3%的HCl溶液中浸泡、消毒后方可棄之。
1.6 打開傳遞窗門,墊上一次性手套,將配好的試劑放到傳遞窗里,關上傳遞窗門。
1.7 在試劑緩沖間脫下工作服,穿上白色工作服。
2 標本制備區(qū)
2.1 在標本制備區(qū)的緩沖間,換上標本制備間專用的工作服,進入標本制備區(qū)。
2.2 打開傳遞窗的門,取出配好的試劑,使用本區(qū)專用的加樣器和帶濾芯槍頭。
2.3 實驗作業(yè)完成時,應及時清理工作臺,使用過的離心管、帶濾芯槍頭須置于3%的HCl溶液中浸泡、消毒后方可棄之。
2.4 做好實驗登記,應使用本室專用的記錄本和筆,打開超凈臺的紫外燈旋鈕到20分鐘處。
2.5 打開傳遞窗門,墊上一次性手套,將配好的試劑放到傳遞窗里,關上傳遞窗門。
2.6 提取基因組模板,提取過程中丟棄的槍頭、離心管和廢液請丟棄在此垃圾袋并于實驗結束后立即將垃圾袋扎口丟棄。提取質(zhì)??上忍崛∫吧唾|(zhì)粒再提取突變型質(zhì)粒。每次提取工作完成后擦拭臺面。
3 擴增區(qū)
3.1 在擴增間的緩沖間,換上擴增間專用工作服。
3.2 打開傳遞窗門,取出配好的試劑,關上傳遞窗門。
3.3 打開PCR儀預熱20min。
3.4 將反應管放入PCR儀中,關好門。
3.5 脫掉手套,設定程序,并命名。
3.6 結束后取出PCR儀里的試劑,用袋子包好方可棄之。機器上不允許存放PCR擴增產(chǎn)物,每次實驗后請自行及時清理PCR擴增產(chǎn)物。
4 產(chǎn)物分析區(qū)
4.1 在產(chǎn)物分析區(qū)的緩沖間,換上擴增間專用工作服。
4.2 打開傳遞窗門,取出反應完的試劑,關上傳遞窗門。
4.3 按設備操作規(guī)程分析產(chǎn)物。
4.4 實驗作業(yè)完成時,將槍調(diào)至最大量程,及時清理工作臺,做好實驗登記,離開功能間后打開紫外燈照射20分鐘。使用過的離心管、吸頭須置于3%的次氯酸鈉溶液中浸泡后方可棄去。
4.5 結束實驗后,到配電房先把空調(diào)系統(tǒng)關掉,再關掉排風機,之后關掉送風機。
5 傳遞窗的使用
5.1 傳遞窗每天早上滅菌20分鐘一次。當天使用可不用再次滅菌。將試劑放到傳遞窗時,在底下墊上一層手套。
6注意事項
1) PCR實驗室各室使用、進入及單一流向制度,嚴格按照規(guī)程操作,以免造成污染實驗室的嚴重后果。
2) 進入各室時請關好門。
3) 廢液缸中的槍頭滿到3/4時,要及時倒到廢物箱中。
4) 緩沖間的內(nèi)外兩個門不能同時開啟。
5) 每位技術員使用獨立的配液盒不得混用。
