食品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)劃設(shè)計(jì)方案
一、食品微生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)選址：
實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選擇在清潔安靜的場(chǎng)所，遠(yuǎn)離生活區(qū)，鍋爐房與交通要道;實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選擇在光線充足，通風(fēng)良好的場(chǎng)所，要與生產(chǎn)加工車間有一定距離;實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選擇在方便扦樣與檢驗(yàn)，距離車間較近的工作場(chǎng)所。
二、食品微生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)結(jié)構(gòu)和布局：
根據(jù)生產(chǎn)實(shí)際需要，一般工廠應(yīng)設(shè)置細(xì)菌與理化檢驗(yàn)兼有的綜合實(shí)驗(yàn)室，主要包括以下三大部分：細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室、理化實(shí)驗(yàn)室、辦公室。
1. 理化實(shí)驗(yàn)室
理化分析實(shí)驗(yàn)室：(或者和細(xì)菌檢驗(yàn)操作室合并)
?、倮砘治鍪?span>(兼作感觀檢驗(yàn)室)
?、趦x器室(兼放細(xì)菌室顯微鏡等少量?jī)x器)
細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室：
?、偌?xì)菌檢驗(yàn)操作室;
?、跓o菌室;
?、叟囵B(yǎng)基制作室;
?、芟礈煜臼?span>;
食品微生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)一般布局要求如下：
1. 辦公室：辦公室是化驗(yàn)人員進(jìn)行原始記錄等各項(xiàng)工作的場(chǎng)所，是與非化驗(yàn)室人員交往較多的場(chǎng)所，因此，應(yīng)設(shè)在整體綜合化驗(yàn)室的最外層，只需有桌、椅等簡(jiǎn)單設(shè)施即可。
2. 細(xì)菌檢驗(yàn)操作室(常規(guī)操作)細(xì)菌檢驗(yàn)操作室是細(xì)菌培養(yǎng)與檢驗(yàn)主要操作室，主要設(shè)施是實(shí)驗(yàn)臺(tái)。
對(duì)實(shí)驗(yàn)臺(tái)的要求：
a.實(shí)驗(yàn)臺(tái)面積一般不小于2.4×1.3m;
b.實(shí)驗(yàn)臺(tái)位置應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室中心位置，要有充足光線;也可以做邊臺(tái)。
c.實(shí)驗(yàn)臺(tái)兩側(cè)安裝小盆與水龍頭;
d.實(shí)驗(yàn)臺(tái)中間設(shè)置試劑架，架上裝有日光燈與插座;
e.實(shí)驗(yàn)臺(tái)材料要以耐熱、耐酸堿為宜。
3. 無菌室：無菌室通過空氣的凈化和空間的消毒為微生物實(shí)驗(yàn)提供一個(gè)相對(duì)無菌的工作環(huán)境，無菌室是處理樣品和接種培養(yǎng)的主要工作間，應(yīng)與細(xì)菌檢驗(yàn)操作室緊密相連。為滿足無菌室無菌要求，無菌間應(yīng)滿足以下布局：
入口避開走廊，設(shè)在細(xì)菌檢驗(yàn)操作室內(nèi);
b.與操作室用兩道緩沖間隔開;
c.無菌室與緩沖間均裝有紫外燈，要求每3平米安裝30w紫外燈一盞;
d.無菌室內(nèi)設(shè)有實(shí)驗(yàn)臺(tái)中央(實(shí)驗(yàn)臺(tái)與邊臺(tái)皆可)，紫外燈距實(shí)驗(yàn)臺(tái)面要小于1.5m;
e.無菌室與操作室之間設(shè)有雙層窗構(gòu)成小通道。
4. 培養(yǎng)基制作室：培養(yǎng)基室是制作、配制微生物培養(yǎng)所需培養(yǎng)基及檢驗(yàn)用試劑的場(chǎng)所，其主要設(shè)備應(yīng)為邊臺(tái)與藥品柜。
a.邊臺(tái)上要放置電爐，以滿足熔化煮沸培養(yǎng)基時(shí)用;
b.邊臺(tái)材料要耐高熱、耐酸堿;
c.藥品柜分門別類存放一些一般藥品及試劑;
d.危險(xiǎn)、易腐易燃有毒有害藥品單獨(dú)設(shè)保險(xiǎn)柜存放;
e.邊臺(tái)上要放天平，以稱取藥品用。
5. 洗滌消毒室：洗滌消毒室用以消毒洗滌待用與已用之玻璃器皿，培養(yǎng)基及污物，其面積應(yīng)大于10m2 。
為滿足洗滌消毒的功能，洗滌消毒室應(yīng)設(shè)有：
a.1-2個(gè)洗滌池，洗滌池上下水網(wǎng)要暢通;
b.器皿柜或?qū)嶒?yàn)臺(tái)，以放置洗滌好器皿;
c.高壓滅菌鍋，其所用電源應(yīng)滿足用電負(fù)荷;
d.室內(nèi)安有通風(fēng)裝置(通風(fēng)柜)或換氣扇;
e.有條件的單位還可在該室內(nèi)，設(shè)供日常檢驗(yàn)用水蒸餾水器裝置。
6. 理化分析室：(如果沒有條件，這個(gè)可以和微生物常規(guī)實(shí)驗(yàn)室合并)理化分析室是物理化學(xué)分析的主要操作室。
a.實(shí)驗(yàn)臺(tái)與細(xì)菌操作室要求相同
b.設(shè)置通風(fēng)柜以滿足加熱、消化、干燥、燒灼和化學(xué)處理等工作需要;
c.洗滌池。
7. 儀器室：如果沒有條件，這個(gè)可以和微生物常規(guī)實(shí)驗(yàn)室合并，用以放置顯微鏡、電子天平及理化分析用小型儀器;
要求清潔干燥、防潮防蟲、避光;
b.儀器臺(tái)要穩(wěn)固、牢靠。
對(duì)于小的企業(yè)實(shí)驗(yàn)室，如果沒有更多的房間進(jìn)行區(qū)分，應(yīng)該可以通過規(guī)劃房間分區(qū)，以保證實(shí)驗(yàn)室不同工作區(qū)(潔凈區(qū)和一般操作區(qū))之間有一定區(qū)分,因此，最少應(yīng)保證4個(gè)房間或者4個(gè)分區(qū)。
1.洗刷消毒區(qū)域，這個(gè)區(qū)域要求相對(duì)獨(dú)立，最好以房間間隔，因?yàn)檫@個(gè)區(qū)域處理廢物，有一定的污染和濕度。
2.培養(yǎng)基配制區(qū)域，用于培養(yǎng)基的配制，經(jīng)常有水等，需要相對(duì)獨(dú)立一些。
一般操作區(qū)域，這個(gè)是主要操作區(qū)域，微生物的試驗(yàn)結(jié)果的觀察，顯微鏡操作，一般的簡(jiǎn)單理化操作，儀器設(shè)備等，都可以合并在這個(gè)房間或者區(qū)域進(jìn)行。
無菌操作區(qū)域，無菌間，這個(gè)要求獨(dú)立。
三、食品微生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)分區(qū)及基本要求
良好的自然通風(fēng)，必要時(shí)應(yīng)配備抽風(fēng)機(jī)。接種、分離及鑒定細(xì)菌等操作應(yīng)在生物安全柜中進(jìn)行，對(duì)結(jié)核桿菌等傳染性極強(qiáng)的微生物學(xué)檢驗(yàn)時(shí)必須在100 %外臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室接觸多種有害微生物，為了防止交叉污染，保護(hù)工作人員健康，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)至少劃分成3個(gè)區(qū)。
1、清潔區(qū)
包括辦公室、休息室、培養(yǎng)基配制室與試劑儲(chǔ)藏室。此區(qū)域禁止帶人細(xì)菌檢驗(yàn)標(biāo)本。
2、操作區(qū)
(1)整潔：微生物操作區(qū)是各種病原菌相對(duì)集中的地方，為了減少粉塵流動(dòng)，防止交叉污染，操作區(qū)應(yīng)與外界分開。實(shí)驗(yàn)室工作人員進(jìn)入操作區(qū)應(yīng)換鞋，送標(biāo)本人員不進(jìn)入操作區(qū)，操作區(qū)地面用專用拖把每天拖1 次，每周用消毒劑擦洗1 次。每天早上工作前，用紫外線照射30 min ，或每天工作后，用紫外線照射60 min ，對(duì)整個(gè)操作區(qū)進(jìn)行消毒;下午工作結(jié)束后用消毒液消毒工作臺(tái)面，以保證工作環(huán)境的安全清潔。
(2)光線：細(xì)菌培養(yǎng)的細(xì)小菌落及血清試驗(yàn)?zāi)w粒的觀察， 都需要有充足的光線。操作區(qū)除設(shè)置常規(guī)照明燈外，還必須安裝操作臺(tái)燈，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的正確判斷。
(3) 通風(fēng)：由于各種病原菌集中，空氣污濁，實(shí)驗(yàn)室要求保持排的生物安全柜中進(jìn)行。
(4)溫度和濕度：由于無菌操作的要求，實(shí)驗(yàn)過程中經(jīng)常使用酒精燈，因此，微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室不能安裝吊扇。為了達(dá)到實(shí)驗(yàn)所需的適宜溫度，尤其是滿足某些儀器對(duì)溫度濕度的要求，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)安裝空調(diào)。
(5)電源：要求提供穩(wěn)壓、恒頻的電源;根據(jù)儀器設(shè)備要求，必要時(shí)配備不間斷電源。
(6)水源：操作區(qū)內(nèi)須設(shè)置水源。用于標(biāo)本處理(如細(xì)菌染色) 的水槽與工作人員洗手用的水槽不能混用。
(7)污染物處理：操作區(qū)須備有消毒缸，以處理沾有活菌的玻片等污染物品。檢驗(yàn)剩余的標(biāo)本及使用過的帶菌平板、試管均須集中地點(diǎn)安全放置，經(jīng)消毒滅菌處理后再洗滌或丟棄。
3、無菌區(qū)
(1)無菌室應(yīng)完全封閉，進(jìn)出無菌室至少要經(jīng)兩道門，中間隔有緩沖間，無菌室與外間設(shè)置一個(gè)可開閉的窗口，用于傳遞器具。
(2)無菌室必須保持整潔。工作人員進(jìn)入無菌室應(yīng)換專用鞋、專用衣。無菌室使用前須用紫外線消毒30 min ，操作結(jié)束后清潔臺(tái)面，再用紫外線消毒30 min 。定期用乳酸或甲醛熏蒸，徹底消毒。
(3)無菌室僅用于培養(yǎng)基分裝等無菌操作，不能進(jìn)行有菌標(biāo)本的操作。操作人員操作時(shí)應(yīng)嚴(yán)格關(guān)門，并戴好專用的口罩、帽子。
(4)無菌室內(nèi)應(yīng)有空氣過濾裝置，并安裝空調(diào)。
四、食品微生物實(shí)驗(yàn)室必備設(shè)備
1、無菌室和超凈工作臺(tái)
是實(shí)驗(yàn)室的核心部分，主要為樣品提供保護(hù)，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確和人員的安全。
(一)無菌室
無菌室通過空氣的凈化和空間的消毒為微生物實(shí)驗(yàn)提供一個(gè)相對(duì)無菌的工作環(huán)境。無菌室的主要組成設(shè)備的空氣自凈器，傳遞窗，紫外線燈等。嚴(yán)格的無菌室可能還裝備風(fēng)彬室等。
(二)超凈工作臺(tái)
超凈工作臺(tái)作為代替無菌室的一種設(shè)備，使用簡(jiǎn)單方便，為實(shí)驗(yàn)的開展提供一個(gè)相對(duì)無菌的操作臺(tái)。超凈工作臺(tái)灣隊(duì)根據(jù)風(fēng)向分為水平式和垂直式。
2、培養(yǎng)箱
主要用于實(shí)驗(yàn)室微生物的培養(yǎng)，為微生物的生長(zhǎng)提供一個(gè)適宜的環(huán)境。
(一)普通培養(yǎng)箱：一般控制的溫度范圍為：室溫+5～65度，又分為電熱恒溫培養(yǎng)箱和隔水式恒溫培養(yǎng)箱。
(二)生化培養(yǎng)箱：一般控制的溫度范圍為：5～50度。
(三)恒溫恒濕箱：一般控制的溫度范圍為：5～50度，控制的濕度范圍為：50～90%。可作為霉菌培養(yǎng)箱。
(四)厭氧培養(yǎng)箱：適用于厭氧微生物的培養(yǎng)。
3、電熱干燥箱：用于吸管，平皿類玻璃器皿的干熱、滅菌和烘烤。
4、高壓蒸汽滅菌器(又叫高壓滅菌鍋)：物品的滅菌。
5、天平：一般要求具備精度達(dá)到萬分之一的分析天平。
6、顯微鏡：觀察細(xì)菌形態(tài)和動(dòng)力、微生物和微小物品結(jié)構(gòu)的必備儀器。
7、分光光度計(jì)：在QS中用于生產(chǎn)方便面，茶飲料，肉制品，乳制品，棉白糖的企業(yè)。
8、酸度計(jì)：在QS中用于生產(chǎn)果蔬罐頭，白沙糖，飲用水類的企業(yè)。
8、電導(dǎo)率儀和濁度儀:在QS中用于生產(chǎn)飲用水的企業(yè)。
10、折光儀:在QS中用于生產(chǎn)果蔬罐頭，飲料類的企業(yè)。
11、恒溫水溫浴鍋:在QS中用于部分培養(yǎng)溫度需要水浴(如大腸桿菌檢驗(yàn))生產(chǎn)方便面，速凍面米食品企業(yè)。
12、定氮裝置:在QS中用于生產(chǎn)乳制品，含蛋白質(zhì)飲料的企業(yè)。
雜質(zhì)度過濾機(jī):在QS中用于生產(chǎn)乳品企業(yè)。
均質(zhì)器：用于均質(zhì)樣品，有旋轉(zhuǎn)刀片式和拍擊式可以選擇。
冰箱
常規(guī)玻璃器皿
一、 吸管：用于吸取少量液體，常用的吸管為0.1刻度1mL及1.0刻度的10mL吸管。
二、培養(yǎng)皿：為硬質(zhì)玻璃雙碟，常用于分離培養(yǎng)，蓋與底大小應(yīng)合適，常用規(guī)格為90mm。
三、三角燒瓶與廣口瓶：多用于盛培養(yǎng)基及配制溶液，常用的規(guī)格有250mL、500mL、1000mL。
四、燒杯：供盛液或煮沸用，常用的規(guī)格為100mL、250mL、500mL、1000mL
五、量筒：用于液體測(cè)量，常用規(guī)格為100mL、250mL、1000mL
六、試管：用于細(xì)菌培養(yǎng)，有多種規(guī)格。
七、載玻片蓋玻片：細(xì)菌涂片觀察用。
八、試劑瓶：裝試劑用，常用棕色避光
九、其它，如試管架、毛刷、酒精燈、接種針、接種環(huán)等
實(shí)驗(yàn)室配套常用設(shè)備
一、通風(fēng)柜
二、離心機(jī)
三、純水器
四、烘箱
五、低溫冰箱實(shí)驗(yàn)室常用消耗品(凈化工作臺(tái))
六、其他
(一)實(shí)驗(yàn)室耗材(槍頭)、振蕩器、菌落計(jì)數(shù)器、電位 pH計(jì)、高速離心機(jī)、離心管、試管、巴氏吸管、槍頭盒、培養(yǎng)皿、細(xì)胞培養(yǎng)板、酶標(biāo)版、過濾器、移液管、接種環(huán)、接種針、比色皿、培養(yǎng)板、PCR管、量筒燒杯。
(二)常用設(shè)備，如鐵架臺(tái)、升降臺(tái)、滴定臺(tái)、鑷子、攪拌子、各種刷子、藥勺、濾紙、三腳架、支架，等等。
五、化學(xué)試劑和培養(yǎng)基
化學(xué)試劑和培養(yǎng)基：參照所執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)后面的附錄購(gòu)買所需試劑和培養(yǎng)基，目前所用多為合成干粉培養(yǎng)基，試劑也可以購(gòu)買到標(biāo)準(zhǔn)配套試劑。
實(shí)驗(yàn)室配套常用試劑
營(yíng)養(yǎng)瓊脂，乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基，乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基，伊紅美藍(lán)瓊脂等。
微生物實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)備的質(zhì)控要求
(1)孵箱：根據(jù)需要設(shè)置溫度，可調(diào)溫度范圍應(yīng)由室溫至60℃。孵箱溫度允許的波動(dòng)幅度為設(shè)置溫度±1℃，如一般細(xì)菌培養(yǎng)，孵箱溫度應(yīng)為35℃±1℃。應(yīng)每天記錄孵箱溫度，定期加水，每月清潔內(nèi)壁和架子。
(2)冰箱和低溫冰箱：普通冰箱允許溫度為4℃±2℃，每天記錄溫度，并定期清潔。盡量減少冰箱開啟次數(shù)，減少溫度的波動(dòng)。低溫冰箱控制溫度-20℃±5℃，每天觀察溫度并記錄，每隔3個(gè)月除霜1次。一旦溫度失控，及時(shí)調(diào)整。
(3)水浴箱：根據(jù)需要設(shè)置溫度，允許的溫度波動(dòng)幅度為0.5℃，每日檢查水位，記錄溫度。每月擦拭箱體內(nèi)部并換水。
(4)高壓滅菌器：控制溫度121℃，每次使用前觀察并調(diào)整水位，記錄使用時(shí)間、溫度或壓力。每周用嗜熱芽孢桿菌檢測(cè)滅菌效果，每月清理內(nèi)部及換水，并定期檢測(cè)密封圈的密封效果。
(5)二氧化碳培養(yǎng)設(shè)備：常用的有二氧化碳箱和蠟燭罐，要求二氧化碳濃度為5%～10%，箱內(nèi)或罐內(nèi)保持濕度，并用淋病奈瑟菌作培養(yǎng)效果監(jiān)測(cè)。
(6)厭氧培養(yǎng)設(shè)備：主要有厭氧箱、厭氧罐、厭氧袋?；旌蠚怏w組分要求二氧化碳10%、氫氣10%和氮?dú)?span>80%。厭氧箱與厭氧罐內(nèi)部要每周清潔，定期更換催化劑。每次使用培養(yǎng)設(shè)備均應(yīng)用美藍(lán)指示劑或銅綠假單胞菌檢測(cè)厭氧效果。
(7)天平：保持刀刃光滑而鋒利、稱盤清潔，并定期校正。
(8)pH計(jì)：要求誤差不超過0.02，并定期校正。
(9)顯微鏡：最常用的是光學(xué)顯微鏡，應(yīng)注意保護(hù)油鏡。每次使用后應(yīng)用擦鏡紙擦去油鏡頭上的鏡油。每天工作結(jié)束后，應(yīng)用含少量(或酒精)的擦鏡紙擦拭油鏡，再用潔凈擦鏡紙擦干。另外，微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室還用到暗視野顯微鏡、熒光顯微鏡等，均應(yīng)按規(guī)程清潔和保養(yǎng)。
(10)玻璃器皿：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室所用試管、吸管、平皿等應(yīng)潔凈無菌，不殘留酸堿。
(11)接種器具：分為接種針和接種環(huán)兩種。應(yīng)選用傳熱散熱快、耐用和不生銹的材料，早先使用的白金絲由于價(jià)格昂貴，目前多用比較經(jīng)濟(jì)的鎳鉻絲代替。一般要求接種環(huán)長(zhǎng)5～8cm、直徑2～4mm，定量接種環(huán)要定期校正其容量，接種針長(zhǎng)5～8cm。
設(shè)備控制標(biāo)準(zhǔn)保養(yǎng)及監(jiān)測(cè)
高壓滅菌器溫度≥121℃每次用前換水;每月清潔1次。
孵育箱溫度35℃±1℃每天記錄溫度;每月清潔內(nèi)壁和隔板。
水浴箱溫度37 ℃±0.5℃每天記錄溫度;每月擦內(nèi)壁和換水。
冰箱溫度4℃±2℃每天記錄溫度;保持清潔并定期除霜。
低溫冰箱溫度-20℃±5℃每天記錄溫度;保持清潔并定期除霜。
二氧化碳培養(yǎng)箱:二氧化碳5%～10%,每天記錄溫度;定期換水;用淋病奈瑟菌監(jiān)測(cè)效果。
厭氧培養(yǎng)箱:二氧化碳10%、氫氣10%、氮?dú)?span>80%,每次使用時(shí)用厭氧指示劑監(jiān)測(cè)效果。
微生物標(biāo)本采集、運(yùn)送與處理原則
標(biāo)本的正確采集、運(yùn)送與處理對(duì)于細(xì)菌的培養(yǎng)、鑒定，有著十分密切的關(guān)系。
一、標(biāo)本采集
(1)送檢申請(qǐng)單必須惟一標(biāo)識(shí)，并注樣品名稱、型號(hào)、年月、性狀、標(biāo)本來源、采集時(shí)間、檢驗(yàn)?zāi)康募疤砑游锸褂们闆r等，以便實(shí)驗(yàn)室能針對(duì)該標(biāo)本選用相應(yīng)培養(yǎng)基和適宜培養(yǎng)環(huán)境，有利于對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的綜合評(píng)估。
(2)為避免漏檢，確保病原體的檢出，應(yīng)盡量在抗菌藥劑使用前采集標(biāo)本。
(3)標(biāo)本采集時(shí)應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作，減少或避免機(jī)體正常菌群及其他雜菌污染。
(4)以棉拭子采集標(biāo)本，如拭子，應(yīng)插入運(yùn)送培養(yǎng)基送檢。
(5)混有正常菌群的標(biāo)本，如拭子，不可置肉湯培養(yǎng)基內(nèi)送檢。
(6)盛標(biāo)本容器須經(jīng)滅菌處理，但不得使用消毒劑。
(7)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定各種送檢標(biāo)本的采集、運(yùn)送、保存等正確方法和注意事項(xiàng)，并應(yīng)向取樣者詳細(xì)介紹如何正確留取和送檢標(biāo)本。
二、標(biāo)本運(yùn)送
標(biāo)本采集后應(yīng)立即送至微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室。標(biāo)本采集后在室溫下超過2h未送達(dá)實(shí)驗(yàn)室者可視為不合格標(biāo)本。生產(chǎn)線邊檢驗(yàn)可提高病原菌檢出率，送檢標(biāo)本必須與檢驗(yàn)申請(qǐng)單有相同的惟一標(biāo)識(shí)。
三、標(biāo)本驗(yàn)收
實(shí)驗(yàn)室只能接收和處理合格的檢驗(yàn)標(biāo)本，因此應(yīng)制定不合格標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn);對(duì)不合格標(biāo)本應(yīng)注明原因，退回，并做記錄。
四、標(biāo)本處理
(1)實(shí)驗(yàn)室收到標(biāo)本后，應(yīng)立即根據(jù)標(biāo)類型及檢驗(yàn)?zāi)康?，選擇合適的培養(yǎng)基接種。
(2)混有正常菌群的標(biāo)本，應(yīng)作定量細(xì)菌培養(yǎng)。不能精確定量或常規(guī)定量操作較困難的標(biāo)本，分離出致病菌及條件致病菌為優(yōu)勢(shì)菌時(shí)，應(yīng)作細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)，同時(shí)注明細(xì)菌量化指標(biāo)。
(3)對(duì)已用抗菌藥物治療的標(biāo)本，可在培養(yǎng)基中加入某些物質(zhì)以中和藥物對(duì)細(xì)菌的抑制作用
微生物檢驗(yàn)標(biāo)本的采集
樣品在使用抗生素前，將標(biāo)本采集在無菌容器內(nèi)，立即送到檢驗(yàn)科細(xì)菌室，特殊檢驗(yàn)應(yīng)先與細(xì)菌室聯(lián)系，再按要求采集標(biāo)本，并立即送檢。
(一)樣品的采集：
1.憑檢驗(yàn)申請(qǐng)單到檢驗(yàn)科領(lǐng)取血培養(yǎng)瓶。
2.采取樣品部位和血培養(yǎng)瓶口應(yīng)嚴(yán)格消毒。
3.通常一般至少作三次血培養(yǎng)，在抗菌藥已實(shí)施者，更應(yīng)增加培養(yǎng)次數(shù)，懷疑特定菌種一般應(yīng)一日作三次培養(yǎng)，必要時(shí)需追加次數(shù)。
4.應(yīng)在生產(chǎn)高峰時(shí)采集。
5.對(duì)疑為細(xì)菌性污染的產(chǎn)品，嚴(yán)格消毒后抽取2～3 ml作增菌培養(yǎng)。
6.每次采樣量5-10ml，培養(yǎng)基與樣品之比以10∶1為宜，以稀釋樣品中的菌物質(zhì)。
7.采樣過程應(yīng)嚴(yán)格無菌操作，避免污染。
培養(yǎng)基質(zhì)量控制
一、配制時(shí)的質(zhì)量控制
(1)容器：配制和分裝培養(yǎng)基的燒瓶、平皿或試管等器材應(yīng)為中性，無酸、堿抑制物殘留，平皿底部要平，以免瓊脂厚薄不一，影響藥敏試驗(yàn)結(jié)果。
(2)成分來源：各種成分來源可靠，不含對(duì)目的菌生長(zhǎng)有抑制的物質(zhì)。特殊要求的培養(yǎng)基，如葡萄糖氧化發(fā)酵試驗(yàn)(O/F 試驗(yàn))，除加入葡萄糖外，不能含有其他糖類，指示劑不能用乙醇溶液，避免O/F試驗(yàn)的假陽(yáng)性。培養(yǎng)基配制用水應(yīng)是蒸餾水。
(3)pH值調(diào)整：根據(jù)培養(yǎng)基的不同要求調(diào)整pH 值，控制在要求范圍的±0.2之內(nèi)。應(yīng)當(dāng)注意，培養(yǎng)基在高壓滅菌后其pH 值降低0.1～0.2，故矯正時(shí)應(yīng)比實(shí)際需要p H值高0.1～0.2。
(4)滅菌：根據(jù)培養(yǎng)基所含成分及配制數(shù)量的不同，選擇不同的滅菌方式，既要達(dá)到滅菌效果，又不破壞培養(yǎng)基成分。一般對(duì)穩(wěn)定的培養(yǎng)基，如MH瓊脂、營(yíng)養(yǎng)瓊脂可用高壓滅菌，即121℃15min ;而含糖的培養(yǎng)基則以108℃滅菌為好，以防止糖類破壞。不耐高熱的物質(zhì)如血清、牛乳等，可采用間隙滅菌法滅菌。
(5)分裝：根據(jù)使用的目的和要求決定分裝量。分裝培養(yǎng)基所用的平皿、試管要求清潔，不殘留酸堿;制備平板培養(yǎng)基時(shí)，操作臺(tái)要水平，以避免瓊脂平板厚薄不一，同時(shí)確保無菌操作。
二、配制后質(zhì)量控制
(1)培養(yǎng)基外觀情況：包括顏色、透明度、有無沉淀和凝固。如發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基表面有裂紋或與培養(yǎng)皿的邊緣分離，說明培養(yǎng)基有脫水現(xiàn)象，必須丟棄。
(2)無菌試驗(yàn)：每一批配好的培養(yǎng)基均須進(jìn)行無菌試驗(yàn)。先滅菌后分裝的培養(yǎng)基，可采用抽樣方法試驗(yàn)，少于100個(gè)樣本通常選取5%～10%的量，如果配制大量培養(yǎng)基，則任意選取10 個(gè)培養(yǎng)基;無菌分裝培養(yǎng)基則需全部做無菌試驗(yàn)。樣本在35 ℃ 或其他適宜的溫度下隔夜培養(yǎng)，如培養(yǎng)基含有血液，則需再置于室溫1天，以檢查嗜冷菌。選擇性培養(yǎng)基因含有抑制物質(zhì)，能抑制許多微生物，因此，可加入10倍量的無菌液體培養(yǎng)基，稀釋抑制物質(zhì)，以利于檢出污染菌。即使做過無菌試驗(yàn)，接種時(shí)，也要檢查每個(gè)平板上的可見菌落。
(3)性能測(cè)試：每一批新制或新購(gòu)的培養(yǎng)基，使用前均須取已知性質(zhì)的庫(kù)存菌種進(jìn)行性能測(cè)試。培養(yǎng)基按目的不同可分為增菌培養(yǎng)基、分離培養(yǎng)基和鑒定培養(yǎng)基。
①增菌培養(yǎng)基：接種少量難以生長(zhǎng)的細(xì)菌，在一定時(shí)間內(nèi)觀察增菌情況，細(xì)菌能生長(zhǎng)的最小接種濃度越小，說明增菌培養(yǎng)基性能愈好。
?、诜蛛x培養(yǎng)基：要求目的菌生長(zhǎng)良好，非目的菌被抑制。一般要求生長(zhǎng)的目的菌接種量不可過多，較好的方法是將測(cè)試菌調(diào)成0.5麥?zhǔn)蠞岫鹊木鷳乙?，再?span>0.001ml的標(biāo)準(zhǔn)接種環(huán)涂劃在培養(yǎng)基上，觀察菌落生長(zhǎng)。
③鑒定培養(yǎng)基：應(yīng)選擇具有典型特征的菌株作性能試驗(yàn)。如三糖鐵瓊脂，須用弗勞地枸櫞酸桿菌、福氏志賀菌及銅綠假單胞菌3種菌分別接種3支培養(yǎng)基，若反應(yīng)結(jié)果為斜面產(chǎn)酸/高層產(chǎn)酸、硫化氫陽(yáng)性，斜面產(chǎn)堿/高層產(chǎn)酸，斜面產(chǎn)堿/高層產(chǎn)堿，質(zhì)量才算合格。
試劑、染色液和血清質(zhì)量控制
一、試劑
各種試劑配好后，均應(yīng)注明試劑名稱、配制日期、有效期及配制者，并作記錄，商品試劑亦應(yīng)注明購(gòu)入日期及有效期。配制好的試劑均應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)菌株作性能測(cè)試，不合格者不能使用。性能測(cè)試間隔可根據(jù)試劑的穩(wěn)定性和使用頻率而定，如氧化酶試劑每天用前測(cè)試，靛基質(zhì)試劑每周測(cè)試1 次。試劑須根據(jù)不同要求作適當(dāng)?shù)馁A存，如氧化酶試劑應(yīng)置棕色瓶中4 ℃冰箱保存。
二、染色液
常用染色液如革蘭染色液在每次配制后并常規(guī)至少每周檢測(cè)1次，用標(biāo)準(zhǔn)菌株金黃色葡萄球菌(ATCC25923)和大腸埃希菌(ATCC 25922)作陽(yáng)性和陰性檢測(cè)。不常用染色液(如鞭毛染色液)應(yīng)于每次使用前，用已知特征的菌株作檢測(cè)。
3.診斷血清
診斷血清的使用和保存必須按說明要求執(zhí)行，一般置4℃冰箱貯存，且不得暴露室溫過久;使用前應(yīng)注意有效期及效價(jià)，第一次使用抗血清時(shí)應(yīng)用相應(yīng)的菌株檢查其有效性，以后每月檢測(cè)1次。如抗血清出現(xiàn)任何顏色的改變或混濁，即不能使用。
微生物檢驗(yàn)標(biāo)本及檢驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量控制
一、微生物檢驗(yàn)標(biāo)本質(zhì)量控制
正確采集和處理標(biāo)本是實(shí)驗(yàn)室檢查獲得正確結(jié)果的前提，目前仍有不少實(shí)驗(yàn)室和檢驗(yàn)人員對(duì)檢驗(yàn)標(biāo)本分析前質(zhì)量控制的重視不夠。對(duì)標(biāo)本采集方法和時(shí)間、標(biāo)本來源，實(shí)驗(yàn)室人員雖然不能直接控制，但有責(zé)任人員正確采集標(biāo)本，可采取集中講課、個(gè)別輔導(dǎo)作取標(biāo)本示教等方式給予指導(dǎo)。同時(shí)控制影響檢驗(yàn)質(zhì)量的其他因素，如檢驗(yàn)標(biāo)本的運(yùn)送、儲(chǔ)存和處理等，均應(yīng)統(tǒng)一按正確的操作規(guī)程執(zhí)行。
二、微生物檢驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量控制
1.檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告
微生物學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告單是反映微生物學(xué)檢驗(yàn)水平的重要依據(jù)之一。報(bào)告單填寫要準(zhǔn)確、規(guī)范，將微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)上的新進(jìn)展充分反映在報(bào)告單上，如細(xì)菌名的更改，新的耐藥原因?qū)е碌乃幟艚Y(jié)果修正等。每一份報(bào)告單發(fā)出前都要由專人審核，包括檢查項(xiàng)目是否遺漏、結(jié)果有無明顯錯(cuò)誤、字跡是否清楚、檢驗(yàn)者有無蓋章簽名等。核對(duì)后蓋上審核章，才能將報(bào)告單正式發(fā)出。同時(shí)，微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)實(shí)行分級(jí)報(bào)告制度，將標(biāo)本顯微鏡檢查的初級(jí)結(jié)果報(bào)告生產(chǎn)部門，并進(jìn)行初級(jí)試驗(yàn)，為早期解決質(zhì)量問題提供依據(jù)。
2.檢驗(yàn)結(jié)果記錄
實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定實(shí)驗(yàn)結(jié)果登記制度和原始記錄，包括取樣資料，細(xì)菌的分離、鑒定及培養(yǎng)結(jié)果，培養(yǎng)基和試劑的配制記錄。以備產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告單遺失或結(jié)果有疑問時(shí)查考。詳細(xì)的結(jié)果記錄，有利于定時(shí)統(tǒng)計(jì)、分析和總結(jié)產(chǎn)品感染菌的類型及其他情況，及時(shí)通報(bào)其他部門，指導(dǎo)生產(chǎn)原料的使用和采購(gòu)
